靶向性CIK治療慢性乙型肝炎研究

解放軍454醫(yī)院    張長(zhǎng)法

一.

一.乙型肝炎流行病學(xué)現(xiàn)狀

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染呈全球性分布

20億人曾感染HBV，占全球人口1/3；   25%~40%最終將死于肝硬化或肝癌；每年因乙肝相關(guān)死亡75萬(wàn)例！  慢性HBV感染者3.85億，占全球人口6%，其中亞洲占2/3 ，中國(guó)占1/3

2、我國(guó)乙肝的流行現(xiàn)狀

2008年4月21日衛(wèi)生部疾病控制局發(fā)布

12億×9.75 =1.17億（2002年我國(guó)乙肝表面抗原攜帶率為9.75%）

13億×9.75 =1.27億

13億×7.18 = 0.93億（2006年我國(guó)乙肝表面抗原攜帶率為7.18%）

1.27億－0.97 = 3000萬(wàn)（相比之下減少3000多萬(wàn)）

近16年來(lái)，我國(guó)乙型肝炎流行病學(xué)變遷 HBsAg流行率明顯下降

1992                     2006

調(diào)查人數(shù)            67,124                    81,950

調(diào)查省份數(shù)           30                        31

調(diào)查疾病監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)     145                      160

檢測(cè)方法             RIA                     EIA

人群HBsAg  %      9.8%                     7.2

5以下兒童HBsAg %  9.8%                     1.1

       1992、2006年全國(guó)乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查

我國(guó)各地HBsAg陽(yáng)性率

 HBsAg % (95% CI)

地區(qū)              1992              2006

華北               5.5              3.8 (3.0~4.7)

西北               8.7              4.9 (4.2~5.6)

東北               10.7             5.6 (4.4~6.8)

西南               8.9              7.9 (6.1~9.7)

華東               9.9              7.8 (6.6~8.9)

華中               12.8             9.1 (8.1~10.1)

          2006年全國(guó)乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查

二.目前抗病毒治療突破與瓶頸

臨床上治療有了很大的進(jìn)展：普通干擾素；聚乙二醇干擾素；核甘類(lèi)藥物

存在的問(wèn)題：不能清除cccDNA,     病毒變異、療程不確定性

三.我國(guó)慢性乙型肝炎治療的困難

1.母嬰垂直傳染病例多,免疫耐受      2.幼年時(shí)感染多,免疫低下

3.cccDNA整合多,病程長(zhǎng)              4.病毒基因變異多,多位點(diǎn)

四、CIK治療慢乙肝臨床療效

307例患者接受治療20周及隨訪(fǎng)24周  評(píng)價(jià):

1.基線(xiàn)血清HBVDNA下降水平或清除率，       2.HBeAg消失或轉(zhuǎn)換率

3.HBsAg的清除率                            4.肝功能的復(fù)常率

治療方法和流程

從病人自身采外周血50－100ml————分離淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)約2－3周————1%白蛋白生理鹽水洗滌，懸浮于1%白蛋白生理鹽水中————進(jìn)行無(wú)菌和內(nèi)毒素試驗(yàn)，確認(rèn)淋巴細(xì)胞無(wú)污染————將CIK細(xì)胞通過(guò)輸血器經(jīng)靜脈輸給患者

免疫治療的基本程序：

1、接診；2、篩選；3、單采；4、細(xì)胞培養(yǎng)；5、回輸治療；6、治療期觀察；7、統(tǒng)計(jì)分析

篩選適合CIK治療的患者（略）建立患者病歷并準(zhǔn)備（略）治療前檢查（略）

設(shè)備、材料和試劑：千級(jí)超潔凈工作間、百級(jí)超潔凈工作臺(tái)、大容量低溫離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、血細(xì)胞分離機(jī)、大容量培養(yǎng)袋、無(wú)血清培養(yǎng)基、IL-2、INF-γ、IL-1、抗CD3單抗等

單采：治療室護(hù)士遵醫(yī)囑測(cè)量生命體征并記錄，給于空腹抽血并將血樣標(biāo)本送至檢測(cè)室，檢驗(yàn)科（檢測(cè)HBV-DNA、檢測(cè)肝功、腎功、血常規(guī)）。將患者帶進(jìn)單采室，把病歷送至單采室護(hù)士，準(zhǔn)備單采。

確認(rèn)管路安裝是否正確 ，固定袖帶，無(wú)菌操作消毒后進(jìn)行穿刺，按下DRAW鍵開(kāi)始采血。記錄采集時(shí)間。采集過(guò)程中嚴(yán)密觀察患者生命體征及屏幕提示信息。嚴(yán)密觀察針頭處情況。

成功采集最終產(chǎn)品后貼標(biāo)簽于PBSC袋（注明患者姓名、性別、年齡、編號(hào)、總血量、采集量），將終產(chǎn)品通過(guò)遞物口送到細(xì)胞室進(jìn)行培養(yǎng)。

 細(xì)胞培養(yǎng)

將血袋內(nèi)的血用50ml注射器抽出 ，大容量冷凍離心機(jī)以 3500 rpm, 4℃，離心5 min，用移液器將管內(nèi)上清液棄去，加洗液（500ml生理鹽水+0.25g人血白蛋白）至40ml，用5ml移液器將血混勻。此操作重復(fù)3次。

混勻的血細(xì)胞加入到2個(gè)培養(yǎng)袋（內(nèi)含RPMI 1640、谷氨酰胺、0.25g人血白蛋白 ）中，加入白介素-2誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為CIK。

將培養(yǎng)袋放入二氧化碳培養(yǎng)箱中，37℃、5% CO2。

每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，及時(shí)更換培養(yǎng)液；第8天做細(xì)菌檢測(cè)，第10天收集1袋細(xì)胞做第一次回輸，另1袋細(xì)胞收集做凍存。 

回輸治療

測(cè)量患者生命體征并記錄 。

通知細(xì)胞室將0.9%生理鹽水100ml和1ml、2ml注射器各一支送至遞物窗口，填寫(xiě)回輸者名單及時(shí)間，有特殊更改的要給予備注，通知患者進(jìn)食等候。

回輸前認(rèn)真執(zhí)行“三查七對(duì)”，核對(duì)無(wú)誤進(jìn)行回輸，回輸過(guò)程中要嚴(yán)密觀察患者有無(wú)異常反應(yīng)，若有異常及時(shí)通知相關(guān)醫(yī)師。

回輸結(jié)束后，觀察患者20-30分鐘無(wú)異常情況方許可患者離開(kāi) 。

輸液器特殊處理，針頭和輸液管分離，分別裝入醫(yī)用垃圾由醫(yī)院統(tǒng)一銷(xiāo)毀。

治療期觀察    隨時(shí)觀察病人的回輸治療反應(yīng)，并作出相應(yīng)處理，并記病程記錄。

開(kāi)出本次應(yīng)做的化驗(yàn)檢查單 。通知病人下次治療時(shí)間。下次回輸?shù)那皟商煸俅瓮ㄖ∪嘶剌敗?SPAN lang=EN-US>

治療過(guò)程中的檢查（略）       治療結(jié)束后的檢查（略）    

治療后的療效評(píng)估指標(biāo)

治療過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)（0、1、2、3、4月）的檢測(cè)評(píng)價(jià)：

HBV-DNA清除率。                        與基線(xiàn)血清HBV- DNA水平下降log10數(shù)比較。

ALT復(fù)常的病人比例。                    HBeAg消失，HBeAg血清轉(zhuǎn)換的病人比例。